CRISPR/Cas9系統(tǒng)已經(jīng)成為一個強(qiáng)大的基因編輯工具,因?yàn)槠涓叩陌邢蛱禺愋?,編輯效率和易用性。該技術(shù)的強(qiáng)大主要源于它的簡單,因?yàn)槿恐恍枰粋€Cas9核酸酶結(jié)合一個單鏈向?qū)NA(single guide RNA,sgRNA) 就可以決定靶向特異性(Jinek et al. 2012)。這種RNA編程的(RNA-programmable)方法利用了非同源末端連接(non-homologous end joining,NHEJ) DNA修復(fù)途徑的易錯特性,進(jìn)而產(chǎn)生基因敲除(通過插入/刪除)。這種方法也可以通過同源重組(homology-directed repair,HDR)途徑被用于基因敲入。
CRISPR/Cas9系統(tǒng)的組件可以通過多種方法成功導(dǎo)入至靶細(xì)胞,包括基于載體的表達(dá)系統(tǒng),RNA轉(zhuǎn)染, 導(dǎo)入Cas9/sgRNA核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)復(fù)合物(Sander and Joung 2014)等。與基于載體的方法相比,直接導(dǎo)入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉(zhuǎn)入基因編輯實(shí)驗(yàn)的方法,同時脫靶效應(yīng)的可能性更?。↘im et al. 2014)。
一旦Cas9/sgRNA RNP復(fù)合物被導(dǎo)入,為了分離和篩選感興趣的基因型,單細(xì)胞必須被分離并擴(kuò)增為克隆細(xì)胞系。傳統(tǒng)上,從基因編輯的hiPS細(xì)胞建立一個克隆群是低效的、具有挑戰(zhàn)性的和耗時的,因?yàn)閔iPS 細(xì)胞是以集落生長和傳代的。通常,這會導(dǎo)致細(xì)胞死亡和提前分化。然而,Cellartis基因編輯和單細(xì)胞克隆系統(tǒng)包含一個成分確定的培養(yǎng)系統(tǒng)(由基礎(chǔ)培養(yǎng)基,包被劑,和添加劑組成),用于有效形成單細(xì)胞克隆和擴(kuò)增基因編輯后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一個基于單層培養(yǎng)的系統(tǒng),規(guī)避了集落狀培養(yǎng)帶來的挑戰(zhàn),允許單細(xì)胞傳代和促進(jìn)接種的單細(xì)胞存活和后續(xù)擴(kuò)增。
Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個完整的,在無飼養(yǎng)層和成分確定條件下,用于hiPSCs有效擴(kuò)增和擴(kuò)大生產(chǎn)的系統(tǒng)。試劑盒包含了從接種單細(xì)胞至96孔板到擴(kuò)增至48孔板過程中所有必要的試劑。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后,hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。
Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一個完整的系統(tǒng),允許通過電穿孔的方法對hiPSCs進(jìn)行有效的基因編輯以及隨后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增至48孔板。該系統(tǒng)中提供了重組Cas9蛋白質(zhì),以及產(chǎn)生大量sgRNAs所有必要的試劑,用于電穿孔hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 組份,用于進(jìn)行基因編輯后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后,hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。
Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一個完整的系統(tǒng),允許通過gesicle導(dǎo)入Cas9/sgRNA復(fù)合物進(jìn)行有效的基因編輯隨后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增至48孔板。Gesicles是一種無毒的、高效的、替代電穿孔的方法,不依賴昂貴的設(shè)備或耗材。系統(tǒng)中提供所有的必要試劑用于產(chǎn)生細(xì)胞衍生的納米囊泡(稱做gesicles),來轉(zhuǎn)導(dǎo)Cas9和sgRNA至hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit(前面所述)組份,用于進(jìn)行基因編輯后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后,hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱:Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit
產(chǎn)品貨號:Y30021
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CellArtis代理商:重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司
Cellartis品牌擁有超過15年的豐富經(jīng)驗(yàn),可為涉及干細(xì)胞的研究應(yīng)用提供產(chǎn)品和服務(wù)。該品牌源自同名公司(現(xiàn)為Takara Bio Europe AB),該公司由哥德堡大學(xué)的研究人員于2001年成立。從歷*看,Cellartis品牌的主要關(guān)注點(diǎn)是開發(fā)和分配干細(xì)胞系,包括用于人類或普通用途的人類胚胎干細(xì)胞(hESCs)和人類誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞(hiPSC)。近,該品牌的范圍已擴(kuò)大到還包括諸如培養(yǎng)系統(tǒng),培養(yǎng)基和試劑之類的產(chǎn)品,這些產(chǎn)品使我們的專業(yè)知識和創(chuàng)新技術(shù)更容易為生命科學(xué)研究人員所使用。該品牌的重要里程碑涉及Cellartis DEF-CS培養(yǎng)系統(tǒng)的開發(fā)和商業(yè)化,這是一種培養(yǎng)干細(xì)胞的革命性方法,相對于其他方法,它具有明顯的優(yōu)勢。